有很多名詞都用來(lái)描述病毒溶液的滴度:Vp (病毒顆粒)或OPV(光學(xué)顆粒單位);GTU(基因轉移單位)或轉導顆粒(BFU即藍點(diǎn)形成單位,與GTU類(lèi)似); PFU(空斑形成單位);TCID50(50%組織培養感染劑量)。
不同的概念緣于不同的滴度測定方法,這些方法包括2類(lèi):物理方法(VP)和生物學(xué)方法(GTU、PFU、TCID50)。
(1)測定VP的方法是測定病毒顆粒在260nm處的吸光度(病毒DNA和蛋白的總吸光度中主要為DNA),1個(gè)OD值相當于1.q#X1012個(gè)病毒顆粒。用這種方法進(jìn)行測定在各個(gè)實(shí)驗室中都較為穩定,但它不能區分感染性和缺陷性病毒顆粒。因此這種方法只能提供病毒的量,至于質(zhì),比如是否含有缺陷性顆粒則沒(méi)有考慮在內。
(2)GTU則測定感染后能表達報告基因的細胞數量。這個(gè)過(guò)程中,病毒將DNA轉人細胞,在一個(gè)感染周期結束前立即測定表達報告基因的細胞。如果重組腺病毒含有報告基因如GFP或LacZ等則可以用這種方法進(jìn)行測定,病毒保存液通常不用這種方法來(lái)進(jìn)行描述。
(3)PFU是測定腺病毒滴度早的標準方法,主要測定單層細胞培養中病毒裂解空斑的形成?瞻咝纬尚枰S多個(gè)感染周期,得到終結果通常需要三個(gè)星期。一般來(lái)說(shuō),這種方法得到的結果很少能在其它實(shí)驗室重復,即使在同一實(shí)驗室內,不同技術(shù)員操作也很少能得到相同的結果。
(4)TCID50已被用于測定許多種病毒的滴度,但以前并不用于腺病毒。病毒稀釋液與細胞在96孔板進(jìn)行培養,然后監測每孔是否CPE。TCID50方法相對PFU方法而言有幾個(gè)優(yōu)點(diǎn),如速度是PFU的2倍.結果更具預料性,在不同操作個(gè)體間也更穩定。
所有生物學(xué)方法所得到的結果在不同實(shí)驗室之間往往有所差異,它主要與病毒感染方法有關(guān)。許多因素如加人的病毒儲存液的量、管子的類(lèi)型、培養的時(shí)間、細胞和培養液的量等都會(huì )影響結果。
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