(1)稀釋
①以無(wú)菌操作將檢樣25g(mL)放于含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶?jì)然驕缇槔弮�，�?jīng)充分振搖或研磨做成1: 10的均勻稀釋液。
②用lmL滅菌吸管吸取1: 10稀釋液lmL,注入含有9mL滅菌生理鹽永或其他稀釋液的試管內，振搖試管混勻，做成1: 100的稀釋液。
③另取lmL滅菌吸管，按上條操作依次做10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用1支lmL滅菌吸管。
④根據對檢樣污染情況的估計，一般選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三管。
⑤乳糖發(fā)酵試驗
將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內，每一稀釋度接種三管，置36°C士q#°C培養箱內，培養24h±2h，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報告大腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣者則繼續做以下實(shí)驗。
(2)分離培養將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上，置36°c±rc培養箱內培養18～24h，然后取出，觀(guān)察菌落形態(tài)，并做革蘭染色和證實(shí)試驗。
(3)證實(shí)試驗在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1～2個(gè)進(jìn)行革蘭染色，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，置36°C士1°C培養箱內培養24h±2h，觀(guān)察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭染色為陰性的無(wú)芽孢桿菌，即可報告為大腸菌群陽(yáng)性。
(4)報告根據證實(shí)為大腸菌群陽(yáng)性的管數，查MPN檢索表，報告每100mL(g)大腸菌群的MPN值。
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